产品货号：
BTN140386
中文名称：
酿酒酵母AH109化学感受态细胞
英文名称：
E.coli AH109 Chemical Competent Cell
产品规格：
10×100μL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
AH109菌株来源于PJ69-2A酵母菌株，将lacZ报告基因引入PJ69-2A诞生了AH109，此菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为:trp1，leu2，报告基因为：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1。AH109-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1～174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端768～881位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。
GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1～174位氨基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768～881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(GAL1，GAL2，MEL1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为＞104cfu/μg DNA。
菌株基因型：
MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3,MEL1 GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2,URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ
产品组成
储存条件
感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效期半年。
自备试剂
目的DNA、YPDA、SD培养基等。
使用方法
注意事项
相关搜索：酿酒酵母AH109化学感受态细胞，E.coli AH109 Chemical Competent Cell
GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1～174位氨基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768～881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(GAL1，GAL2，MEL1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为＞104cfu/μg DNA。
菌株基因型：
MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3,MEL1 GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2,URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ
产品组成
| 成分 | 规格 |
| AH109感受态细胞 | 0.1mL×10支 |
| PGADT7，10ng/μL | 10μL |
| Carrier DNA，5μg/μL | 100μL |
| PEG/LiAc | 5mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件
感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效期半年。
自备试剂
目的DNA、YPDA、SD培养基等。
使用方法
- 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50～100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。 - 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入2～5μg预冷的目的质粒、10μLCarrier DNA(95～100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)、500μL PEG/LiAc，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6～8次混匀)。
- 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6～8次混匀)。
- 5000rpm离心40秒，弃上清。取400μL ddH2O重悬沉淀，5000rpm离心30秒，弃上清。
- 取50μL ddH2O重悬沉淀，涂板，29℃培养48～96小时。
注意事项
- 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27～30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
- 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P - ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
- 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。
- 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
- 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
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